Die Antikörperverschiebung: Vom Aszites zur Kultur

Antikörper sind die ultimative Waffe des Körpers, die von B-Lymphozyten produziert wird, um im Blut und anderen Körperflüssigkeiten zu zirkulieren und eindringende Krankheitserreger abzuwehren. Diese Proteine ​​können einzigartige Antigene schnell erkennen und entweder die angreifende Zelle für den Angriff durch andere Mitglieder des Immunsystems markieren oder das Ziel direkt neutralisieren. In Anbetracht dieser angeborenen Fähigkeit, jedes bestimmte Antigen zu binden und zu markieren, wird der Nutzen des Antikörpers in Forschung, Diagnostik und in jüngerer Zeit von Therapeutika ständig erweitert, da immer neue Anwendungen entdeckt werden.

Antikörper sind zu einem wesentlichen Bestandteil einer Vielzahl von Forschungsdisziplinen geworden, die für Western Blots, Enzym-Immunosorbent-Assays (ELISA), Immunhistochemie (IHC), Durchflusszytometrie und vieles mehr unabdingbar sind. In Diagnostika und Therapeutika bieten sie eine genaue Antigenerkennung und selektive Bindung an krankheitsspezifische Zelltypen. Bei mehr als 300 Unternehmen, die Antikörper herstellen und Tausende von Antikörpern die zur Auswahl stehen, ist die Auswahl eines hochqualitativen Antikörpers, der für eine bestimmte Anwendung spezifisch ist, aus monoklonalen Antikörpern, die aus einem einzelnen Klon von B-Lymphozyten oder aus polyklonalen Antikörpern, die von mehreren B-Lymphozytenklonen erzeugt werden, ein kritischer Teil der Planung und Durchführung von Experimenten.

Da es jedoch schwierig sein kann, den richtigen Antikörper für eine gegebene Studie zu finden, sind Forscher hinsichtlich der Antikörpervalidierung und der experimentellen Reproduzierbarkeit häufig unzufrieden. Obwohl Forscher durchaus einiges tun können, ist eine sorgfältige Antikörperproduktion für den Erfolge einer Studie von entscheidender Bedeutung. Das Verständnis der Methoden zur Herstellung von Antikörpern und wie diese für bestimmte Anwendungen eher geeignet sein können, kann nicht nur bei der Antikörperauswahl, sondern auch bei der Authentifizierung von Experimenten behilflich sein.

 

Sicherstellung der Qualität bei der Herstellung monoklonaler Antikörper

Die Herstellung von qualitativ hochwertigen monoklonalen Antikörpern hängt im Allgemeinen von zwei bekannten Verfahren ab. Die in-vivo-Produktion unter Verwendung von Ascites, die 1975 von Kohler und Milstein entwickelt wurde, kann hohe Konzentrationen von monoklonalen Antikörpern mit hoher Affinität erzeugen und kann posttranslationale Modifikationen wie die Glykosylierung in das Tiermodell einschließen. Diese Methode hat die Immunologie verändert und Tausende von verschiedenen Antikörpern für Forschung und therapeutische Zwecke geschaffen. Trotzdem gibt es mit Aszites einschränkende Faktoren, insbesondere ethische Gesichtspunkte für die Mausmodelle. Daraus folgt, dass in-vitro-Methoden sich in letzter Zeit zu einem Standard für eine erfolgreiche Antikörperproduktion entwickelt haben.

Die meisten Antikörperproduktionsmethoden beginnen mit der Injektion eines Antigens in Mäuse oder Ratten. Ihre extrahierten lymphoiden Zellen können mit Myelomzellen fusioniert werden, um geklonte Hybridome zu erzeugen. Die Hybridomzelllinien, die den gewünschten Antikörper produzieren, werden isoliert und zu „Antikörperproduktionshäusern“ geklont. Für die In-vivo-Produktion ist ein zweites Tiermodell erforderlich, bei dem Hybridomzellen in die Maus injiziert werden und sich als Aszites-Tumore ausdehnen, wobei hohe Konzentrationen des Zielantikörpers in die umgebende Flüssigkeit abgegeben werden. Diese Antikörper können dann gesammelt und gereinigt werden.

Während das In-vivo-Verfahren ein bestätigter Ansatz für die Antikörperproduktion ist, führt die Verwendung von Tiermodellen auf diese Weise zu Besorgnis. Gesetze und Richtlinien beschränken die Verwendung von Tieren zugunsten neuerer In-vitro-Verfahren, wobei das Wohlergehen der Tiere hervorgehoben wird, jedoch immer noch der Nutzen erkannt wird, den die In-vivo-Produktion bietet. Allerdings, können in einigen Fällen nur Aszites-Modelle verwendet werden, um je nach Anwendung und Art des benötigten Antikörpers Antikörper herzustellen. In Kenntnis dieser Problematik listet das National Institutes of Health (NIH) die Umstände auf, unter denen die Aszitesmethode zulässig ist, einschließlich der Tatsache, dass sich Hybridomzelllinien nicht an In-vitro-Bedingungen anpassen können, um einen höheren Antikörperproduktionsbedarf zu erreichen oder Probleme mit einer nach der Zellkultur-folgende Reinigung nachlassenden Antikörperaktivität zu lösen.

In-vitro-Methoden umgehen ethische Probleme bei der Verwendung von Tieren, indem Hybridomzellen in Kultur gezüchtet werden, wo die Zellen Antikörper direkt in das Kulturmedium ausscheiden. Dieser Ansatz erzeugt qualitativ hochwertige Antikörper mit den Vorteilen einer einfachen Reinigung und eines großen Produktionspotenzials, kann jedoch nicht verwendet werden, wenn Antikörper eine posttranslationale Modifikation erfordern oder wenn hohe Ausbeuten erforderlich sind.

Worauf Sie bei einem guten Antikörper achten müssen

Die Aufrechterhaltung der Antikörperstruktur und -reaktivität zusammen mit der Verhinderung der Systemkontamination sind zwei Hauptprobleme, die bei der Antikörperproduktion auftreten und die Studienergebnisse ernsthaft beeinträchtigen können. Stringente Reinigungsverfahren können die native Struktur eines Antikörpers verändern und zu einem Verlust der Reaktivität oder Bindungsfähigkeit führen. Eine Denaturierung kann ebenfalls auftreten, wodurch die Immunogenität verbessert und die in-vivo-Antikörper-Retentionszeit verringert wird. Kontaminationen durch das Vorhandensein anderer Immunglobuline im Tiermodell könnten die Antikörpersammlung bei In-vivo-Methoden behindern und die Immunreaktivität beeinflussen, während Probleme mit potenziellen Endotoxinen, Hefe, Pilzen oder Mykoplasmen in Zellkultur die Menge und Qualität der in-vitro hergestellten Antikörper beeinflussen können. Sicherzustellen, dass ein Anbieter Antikörper produziert, die diese Probleme nicht enthalten, und validierte Antikörper zur Verfügung stellt, ist für die Gesamtleistung im Labor von entscheidender Bedeutung.

Eine der wichtigsten Eigenschaften eines Antikörpers ist seine Fähigkeit, selektiv an ein Antigen zu binden. Um zu bestimmen, welcher Antikörper für welche Anwendung geeignet ist, muss zunächst eine definierte Spezifikation des Zielanalyten vorliegen. Nach dem Festlegen eingehender Validierungsdaten durch ELISA-Tests, Western Blots und IHC unter Verwendung biologisch relevanter Probentypen und -gewebe kann die Funktion des Antikörpers genau wiedergegeben werden.

Ob zum Screening, zur Diagnose oder sogar zur Behandlung – Sensitivität, Spezifität und Reproduzierbarkeit – alles sind entscheidende Faktoren bei Qualitätsantikörpern. Aus Herstellersicht muss im Produktionsprozess sorgfältig vorgegangen werden, um eine erfolgreiche Herstellung sicherzustellen, einschließlich einer ersten Immunisierung, um die Differenzierung der B-Lymphozyten in reifere Konfigurationen auszulösen und der selektiven Fusion der Antigen-sensibilisierten B-Lymphozyten mit Myelomzellen, um effektive Hybridomzelllinien zu erzeugen. Die überlegene Hybridomtechnologie kann die Erzeugung monoklonaler Antikörper mit hoher Affinität und Spezifität unterstützen und zu einer positiven Validierung und experimentellen Reproduzierbarkeit beitragen.

Cell Sciences liefert sowohl in-vitro als auch in-vivo hergestellte monoklonale, polyklonale und funktionelle biologisch aktive Antikörper, je nachdem welche Methode die Qualität, Spezifität und Reaktivität liefert, die für erfolgreiche und reproduzierbare Ergebnisse am besten ist. Da die Anzahl der Anwendungen, die durch Antikörper-basierte Technologien möglich werden, ständig zunimmt, arbeitet Cell Sciences daran, das große Arsenal derzeit verfügbarer Antikörper zu ergänzen, um die erhöhte Nachfrage nach Antikörpern für neue interessierende Ziele zu befriedigen.

Cell Sciences bietet eine umfassende Auswahl an monoklonalen Antikörpern, die in Zellkulturen produziert und frei von Konservierungsstoffen sind, die Sie exklusiv bei Hölzel Diagnostika erhalten.

Hier sind Beispiele Ihrer Topseller:

CS-CDM265 Mouse Anti-Human IL-6  (clone B-E8)

CS-CDM005 Mouse Anti-Human IL-2R alpha (clone B-G3)

CS-CMV015 (Mouse Anti-Human VEGF (clone 3 6D3)

CS-CDM049 Mouse Anti-Human E-Selectin/CD62E (clone B-P7)

CS-CDM288 Mouse Anti-Human IL-17F (clone B-F60)  

CS-CDM012 Mouse Anti-Human IL-6ST (clone B-R3)

CS-CDM271 Mouse Anti-Human IL-12 p35 + p70 (clone B-T21)

CS-CMV012 (Mouse Anti-Human VEGFR-2/KDR (clone 3 4H3)

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